中山大学医院：8例克罗恩病患者在干细胞治疗后，临床症状和体征显著改善

国际期刊杂志《Stem Cells Translational Medicine》发表了一篇干细胞输注后克罗恩病患者的短期临床反应以及粪便微生物群和代谢物水平的变化的文章，该文章是由以中山大学附属第三医院生物治疗中心为主导的机构刊发的。

得到以下结论：

• 对于克罗恩病 (CD) 患者来说，间充质干细胞输注是安全可行的。
• 8次间充质干细胞输注后，CD患者的临床症状和体征显著改善。
• 在接受间充质干细胞的CD患者中观察到改变的Cetobacterium丰度和亚油酸代谢物水平之间可能存在联系。

什么是克罗恩病

炎症性肠病 (IBD) 包括克罗恩病 (CD) 和溃疡性结肠炎 (UC)，是一种具有复发-缓解病程的慢性免疫介导性肠道炎症疾病。

临床以腹痛、腹泻、体质量下降、腹块、瘘管形成和肠梗阻为特点，可伴有发热等全身表现以及关节、皮肤、眼、口腔黏膜等肠外损害，临床过程的特点是缓解期和复发期的交替进行。

患有慢性复发性CD的患者胃肠道沿线有持续性透壁炎症，需要长期免疫抑制治疗。遗传因素可能在CD中发挥作用。超过30个不同的基因组位点与CD的遗传易感性有关。感染或环境因素可能会引发或加重该疾病。

CD可用皮质类固醇 (CS)、免疫调节剂和“生物疗法”治疗，包括抗TNF-α抗体、维多珠单抗和乌司他单抗。然而，标准抗炎方案并不能阻止疾病进展。必须提高CD缓解率并减少复发。

间充质干细胞 (MSC) 具有抗炎、免疫调节和抗纤维化特性，可以改善克罗恩病的炎症和纤维化成分。理论上，MSC可以抑制肠道炎症、促进长期粘膜愈合并改善患者的生活质量，这表明它们是治疗CD的绝佳选择。多项研究已经评估了干细胞疗法治疗克罗恩病的安全性和有效性，但结果仍然存在争议。我们旨在评估MSC输注对复发性难治性CD患者的短期安全性和有效性。

据推测，CD是在遗传易感宿主中由于环境、微生物和免疫介导因素而发展起来的。微生物群可能在CD的发展、进展和治疗中发挥重要作用。回肠中Faecalibacterium prausnitzii丰度的降低可能导致回肠CD术后复发率和6个月内镜复发率更高。IBD发病机制可能与肠道菌群有关，但菌群失调的具体作用尚不清楚。

我们比较了CD患者接受MSC治疗前后的微生物群落，以确定MSC如何影响肠道菌群。这项研究全面描绘了CD患者的微生物群，并提供了有助于未来菌群失调研究的可靠生物标志物的新见解。

本研究旨在确定间充质干细胞 (MSC) 治疗是否会改变肠道菌群和粪便代谢物途径，并建立肠道菌群与粪便代谢物之间的关系。难治性CD患者入组并接受8次MSCs静脉输注，剂量为1.0×106细胞/kg。评估了间充质干细胞治疗克罗恩病的疗效和安全性。

长期随访

在最后一次输注MSCs后，对患者进行3年的随访，以诊断和记录可能的不良事件并监测临床疗效。患者无法返回进行随访，并且通过电话或微信联系那些转移到不同中心的患者，以收集有关症状复发、间隔用药、手术、住院和实验室检查的数据。通过下消化道内镜检查评估管腔克罗恩病复发。

干细胞治疗克罗恩病的结果

CD患者的临床特征

本研究招募了8名CD患者（平均年龄36.1±7.2岁）。女性患者占62.5%。在8次MSCs输注后，6名患者每人提供了3个粪便样本。一名患者仅接受了4次MSCs输注并拒绝进一步临床治疗。该患者退出研究，未说明任何原因。一名患者接受了8次MSCs输注；但由于便秘，在最后一个时间点未采集粪便样本。

安全

2例患者在第一次UC-MSC输注后出现发热，无需治疗即可缓解。未观察到严重不良反应。输注后没有患者出现呼吸困难。红细胞计数、肝功能和肾功能均正常。

短期疗效结果

总体而言，CD患者的临床症状和体征在8次MSC输注后得到显著缓解，体重、BMI、CDAI评分、CRP水平和ESR的变化均表明了这一点。

• 患者的体重在接受4轮和8轮MSC治疗后分别从51.0±7.8千克增加到52.4±8.0千克和55.0±9.1千克。
• BMI在接受4轮和8轮MSC治疗后分别从20.0±2.6千克/平方米增加到20.5 ±2.7千克/平方米和21.5±3.0千克/平方米，这些增加并不显著。
• 接受4和8轮MSC治疗后，ESR分别从19.1±15.0mm/h降至17.6±15.5mm/h和14.5±11.1mm/h；
• 接受4和8轮MSC治疗后CRP水平分别从12.2±10.7mg/L降至8.1±9.1mg/L和3.1±2.0mg/L；
• 接受4和8轮MSC治疗后，CDAI评分分别从228.9±29.5降至193.1±30.2和150.1±36.7。

与基线记录的值相比，4轮MSC治疗后， CDAI评分（图1A）和CRP 水平（图1B ）下降。8轮MSC治疗后，CDAI评分（图1A）、CRP水平（图1B）和ESR（图1C）下降，体重（图1D）增加。然而，在4或8轮MSC输注后，与基线相比未检测到BMI显著增加（图1E）。

(A) 克罗恩病活动指数 (CDAI)。(B) C反应蛋白 (CRP)。(C) 红细胞沉降率 (ESR)。(D) 体重。(E) 体重指数 (BMI)。(F) 基线 (左图) 和8次间充质基质细胞 (MSC) 输注后 (右图) 的内窥镜检查显示患者1 (上图) 和6 (下图) 的粘膜愈合明显。

通过简易内窥镜评分 (SES-CD) 评估粘膜炎症。

患者1在8次MSC输注后SES-CD从8降至4，患者#6在8次MSC输注后从23降至11。这2名患者的内窥镜检查结果均有所改善（图1F）。在其他3名患者（患者#2、#3和#5）中，从基线到最后一次MSC输注后3个月内未观察到内窥镜检查的显著改善。患者#4、#7和#8在最后一次MSC输注后3个月拒绝接受内窥镜检查，且未说明任何原因。

长期疗效结果

患者#3仅接受了4次MSC输注，并拒绝进一步临床治疗和长期随访。有7名患者（中位年龄39岁；范围：29-51岁）完成了8轮MSC治疗，可在随后的三年内进行评估。

在8轮间充质干细胞治疗后，观察到了显著的改善。

• 患者#1肛瘘复发24个月后，予英夫利昔单抗生物治疗。
• 患者#2腹泻便血复发21个月后，予英夫利昔单抗生物治疗，病情得到控制，总体情况良好。
• 患者#4病情稳定。
• 患者#5肛周脓肿复发3个月后，予英夫利昔单抗生物治疗，病情稳定。患者#6体重下降，内镜检查发现回结肠溃疡增多，予维多珠单抗生物治疗27个月后，予维多珠单抗生物治疗，病情得到控制，总体情况良好。
• 患者#7肛周脓肿复发3个月后，予维多珠单抗生物治疗。患者#76周内使用维多珠单抗2次，肛周脓肿症状加重。患者#7改用乌司他丁，症状缓解，病情稳定。
• 患者#8在最后一次MSC输注后23个月出现肠梗阻。结肠切除术后，使用维多珠单抗治疗，病情稳定。

讨论

我们的研究首次记录了复发性难治性CD患者接受间充质干细胞治疗后肠道菌群的短期变化。首先，我们关注间充质干细胞治疗的安全性和有效性。未观察到严重不良反应 (SAE)。4轮MSC治疗后，CDAI评分和CRP水平下降。

8轮间充质干细胞治疗后，CDAI评分、ESR和CRP水平下降，而体重增加。2名患者内窥镜检查结果出现改善。

在我们的研究中，没有观察到需要住院治疗的严重不良反应。我们的试验表明MSCs是安全的。我们的两名患者在输注MSCs后出现发烧。没有观察到SAE。没有患者在输注后出现呼吸困难。

CD患者在接受8次MSC输注后，临床症状和体征在短期内得到明显改善。MSC输注是否能诱导持久的缓解值得进一步研究。我们初步的长期疗效结果显示，几乎所有患者在24个月内复发，说明MSC输注远非完全治愈，但可提高难治性疾病患者的缓解率。

目前尚不清楚观察到的微生物群和代谢物的变化是MSC输注的继发因素还是炎症改善的结果。在马角质形成细胞中，MSC会分泌CCL2，从而刺激抗菌肽的表达，从而显示抗菌活性增加。MSC分泌酶的抗菌特性既包括直接杀死细菌，也包括间接刺激细菌周围皮肤细胞的免疫反应。

因此，MSC输注可能会直接改变肠道微生物群。相反，微生物群和代谢物的变化可能是炎症改善的结果。由于粘膜屏障功能失调，细菌会侵入肠粘膜，从而引发过度的免疫反应，导致肠道炎症。

MSCs可以促进紧密连接蛋白claudin-1和ZO-1的表达，从而改善肠道屏障功能，这使得基于MSCs的细胞疗法具有支持IBD患者肠道屏障的独特能力。肠道屏障恢复可能会引起微生物群和代谢物的变化。

结论

总之，这是一项针对CD患者的小规模、短期观察性研究。复发性难治性CD患者接受MSC输注是安全的，且耐受性良好。

在2019年我国的《克罗恩病肛瘘诊断与治疗的专家共识意见》中，也提到推荐使用干细胞局部注射治疗克罗恩病肛瘘。

间充质干细胞作为生物疗法的一种，间充质干细胞治疗克罗恩病具有突出的、持久的功效，复发率低，且未曾发生相关不良事件。MSC可以改善克罗恩病的自然病程、愈合受损肠道黏膜、恢复肠道正常功能、提高患者生存质量。相信随着科学技术的进步，治疗经验的丰富，将会有更多患者从中受益。

参考资料：Fan Yang, Xiaofang Zheng, Weicheng Liang, Beibei Ni, Jianxi Lu, Qiuli Liu, Ruixuan Xu, Yizhan He, Mary Miu Yee Waye, Qi Zhang, Yufeng Chen, Xiaoguang Zou, Wenjie Chen, Short-Term Clinical Response and Changes in the Fecal Microbiota and Metabolite Levels in Patients with Crohn’s Disease After Stem Cell Infusions, Stem Cells Translational Medicine, Volume 12, Issue 8, August 2023, Pages 497–509, https://doi.org/10.1093/stcltm/szad036

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